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CATH.a传代贴壁细胞株服务优

2019-6-1 9:04:17发布8次查看

cath.a传代贴壁细胞株服务优
cath.a传代贴壁细胞株服务优 "
细胞传代培养的胰酶消化法:
传代培养:是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移,接种到另一培养瓶的培养。传代细胞,可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代,部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。
实验步骤:① 入无菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒双手;
② 倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液37℃下预热。
③ 超净台台面应整洁,用75%酒精棉球擦拭清洁;
④ 打开超净工作台的紫外灯照射台面20min左右,关闭紫外灯,打开风机清洁空气除去臭氧;
⑤ 点燃酒精灯;取出无菌试管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
⑥ 将培养用液瓶口用75%酒精消毒,过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
⑦ 倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3ml hanks液洗去残留的就培养基,或用少量胰酶涮洗一下。
⑧ 每个大培养瓶加入1ml胰酶,小培养瓶用量酌减,盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶,使细胞脱离胰酶,然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中。
⑨ 加入少量的含血清的新鲜培养基,反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散,再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成细胞悬液,然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖,适度拧紧后稍回转,以利于co2的进入,将培养瓶放回co2培养箱。
⑩ 对悬浮培养细胞,步骤7-9不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清,加入新鲜培养基,然后分装到各瓶中。
注意事项
① 传代培养时注意无菌操作并防止细胞间的交叉污染。所有操作尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每种细胞使用一套器材。
② 每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。
③ 如发现细胞有污染迹象,应立即采取措施,一般应弃置污染的细胞,如果必须挽救,可加含有抗生素的bbs或培养基反复清洗,随后培养基中加入较大量的抗生素,并经常更换培养基。
传代细胞的建系和维持:细胞系的维持通过换液传代再换液、再传代和细胞种子冻存来实现。
对每一个细胞系来说都有其自身的特点,要做好建系的维持必须记录好细胞档案,换液传代和做好细胞系的管理工作。" "
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公司已合作单位有广西医科大学、中山大学附属肿瘤医院、复旦大学、南方医科大学、浙江大学医学院附属邵逸夫医院、深圳市孙逸仙心血管医院、福建省立医院、上海宠乐道宠物医院、中国科学院上海高等研究院、北京市昌平区中西医结合医院、中国医学科学院肿瘤医院、云南中医学院、绍兴市人民医院、汕头大学医学院、首都医科大学附属北京同仁医院、解放军总医院、上海瑞金医院、北京宣武医院、吉林大学第一临床医院、北京中医药大学附属东直门医院、北京天坛医院、复旦大学附属肿瘤医院、河北医科大学第二医院、北京军区总医院、上海市中医医院、浙江省中医院、上海华山医院、哈尔滨医科大学附属第一医院、西安唐都医院、上海长征医院、广州珠江医院、上海仁济医院、山西省眼科医院、航天中心医院、中山大学肿瘤医院、重庆新桥医院、浙江大学附属第二医院、解放军总医院(301医院)、北京大学第三医院、广州军区广州总院、北京大学人民医院、山西医科大学第二医院、、广州中医药大学第一附属医院、宁波市第二医院、广州南方医院、西京医院、复旦大学附属中山医院、浙江大学医学院附属第一医院、重庆医科大学第二医院、北京地坛医院、北京大学第一医院、中山大学附属第一医院、天津市肿瘤医院、第二军医大学东方肝胆外科医院、北京肿瘤医院、湖南省肿瘤医院、南方医院、广东省人民医院、北京市广安门医院、北京同仁医院、复旦大学附属眼耳鼻喉科医院、上海仁济医院(西部)、山东大学齐鲁医院、海军总医院" "
细胞培养方面注意的几点:
无菌意识要强:实验进行前,超净台以紫外灯照射30分钟灭菌,以70 % ethanol擦拭无菌操作抬面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % ethanol擦拭无菌操作抬面。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置,其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以70%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般勿在边缘区域操作。
小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约 45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
选择正确的培养基:不同的细胞可能培养基不同,甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞,有文献就选用neurobase培养基,而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而这种培养基中含有抗氧化剂成分,此时,我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。
瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后,将血清放入,待温度升高到56℃后计时,一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须,一般不要作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。" "
常见培养细胞预防污染的有效措施:
体外培养的细胞受到严重污染时,有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此,防止污染,预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终,才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手:
(1)添加抗生素:各种抗生素性质不同,对各种微生物的作用也不同,联合应用比单用效果好,预防性应用比污染后使用好(但迄今尚无对抗支原体特效抗生素)。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性,且对细胞本身也有一定影响,因此为避免诱导抗药细菌,应定期更换培养系统中的抗生素,或尽可能不用抗生素处理。
(2)从物品、用品消毒灭菌着手:细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时,在无菌过滤操作中,随着滤过体积的增大,滤膜破损的可能性增加,故应选择最后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作:75%的酒精搽拭培养箱后,使用可移动的紫外灯至少消毒30min,加入高压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制300ml的饱和硫酸铜加3l 灭菌超纯水混合成硫酸铜溶液加入水槽中。
(3)从操作者做起:①进无菌室前要彻底洗手,按规定穿隔离衣。开始操作前要用 75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。②操作者动作要轻,安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意,金属器械不能在火焰中长时间烧灼,以防退火;烧过的器械要冷却后才能使用;已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼,因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质,吸管再用时会将其带到培养液中;胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长,以免烧焦产生有毒气体,危害培养细胞,同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。③使用培养液前不宜过早开瓶,开瓶后的培养液应保持斜位,避免直立,以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口,培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。④操作时尽量不要谈话,咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。⑤吸取培养液、细胞悬液时,应专管专用,一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去,以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。⑥操作完毕后应整理好工作台面,用消毒水浸泡的纱布擦拭台面。
(4)防止细胞交叉污染:所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备,一旦怀疑发生交叉污染,可做细胞遗传学方面的鉴定,如发现原有的细胞遗传物发生改变,可以复苏早期冻存的细胞使用。重要细胞系的传代工作应由两人独立进行。
(5)无菌室的彻底消毒①新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室。使用前应稀释即配即用。新洁尔灭和酒精相比,最大的优点是便宜,而且可以稀释50倍用,而同样量的酒精价格可能是新洁尔灭的几十倍。②甲醛熏蒸法:甲醛是一种广谱灭菌剂菌,其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。甲醛价廉,熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。" "
公司提供部分atcc细胞有(限于页面篇幅,公司全部细胞并未展示,如有具体所需细胞,请咨询我们哦┈技┈术(订┈购)┈热┈线┈:┈0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈7┈6┈5┈6┈(┈1┈8┈3┈0┈1┈9┈0┈8┈2┈7┈9┈微┈信┈同┈号┈)┈联┈系┈q┈q:┈1┈2┈9┈2┈7┈5┈2┈1┈5┈7┈);crl-12103|fdc-p1细胞;hb-12317|ng108-15细胞;tib-68|wehi-3细胞;ccl-89|att-20细胞;crl-1732|fox-ny细胞;crl-10609|mmq细胞;crl-1443|bc3h1细胞;crl-1592|iec-6细胞;cl-101|llc-pk1细胞;ccl-96|3t6-swiss albino细胞;crl-1458|l6细胞;crl-1378|rbl-1细胞;ccl-167|mpc-11细胞;crl-1714|tm3细胞;crl-1715|tm4细胞;crl-2132|dsl-6a/c1细胞;ccl-92|3t3-swiss albino细胞;crl-11605|rin-m5f细胞;ccl-93|v79-4细胞;ccl-163.2|balb/3t3细胞;crl-1476|a10细胞;crl-2111|dt40细胞;crl-1447|g-7细胞;crl-2174|sol8细胞;ccl-198|blo-11细胞;ccl-197|nor-10细胞;crl-1777|hit-t15细胞;crl-11506|beta-tc-6细胞;ccl-26|bs-c-1细胞;crl-1548|h-4-ii-e细胞;tib-214|ctll-2细胞;crl-1658|nih/3t3细胞;hb-8064|hep 3b(hep 3b2.1-7)细胞;tib-152|jurkat, clone e6-1细胞;htb-15|u-118 mg细胞;ccl-70|cv-1[part of the wistar special collection]细胞;htb-81|du 145细胞;htb-176|h9细胞;ccl-1|l929细胞;crl-1586|vero c1008细胞;crl-1550|ca ski细胞;ccl-222|colo 205细胞;cl-173|3t3-l1细胞;ccl-240|hl-60细胞;" "
c7020 hara人肺癌鳞癌复苏类型细胞株
c7021 hara-b人肺癌鳞癌复苏类型细胞株
c7022 hcc-1588人肺癌四代细胞四代细胞(鳞)
c7023 hcc-2279人肺癌四代细胞四代细胞(混合)
c7024 hcc-366人肺癌四代细胞四代细胞(非小四代细胞)
c7025 lc-1sq人肺癌鳞癌复苏类型细胞株
c7026 lc-2/ad人肺癌腺癌复苏类型细胞株
c7027 ludlu-1人肺癌鳞癌复苏类型细胞株
c7028 nci-h1417人肺癌四代细胞四代细胞(典型小四代细胞)
c7029 nci-h1569人肺癌复苏类型细胞株
c7030 nci-h1781人支气管肺泡腺癌
c7031 nci-h1954人肺癌复苏类型细胞株
c7032 nci-h2135人非小四代细胞肺癌复苏类型细胞株
c7033 nci-h3122人肺癌复苏类型细胞株
c7034 nci-h3255人肺癌复苏类型细胞株
c7035 oka-c-1人低分化肺癌鳞癌复苏类型细胞株
c7036 rerf-lc-ai人肺癌复苏类型细胞株
c7037 rerf-lc-sq1人肺癌鳞癌复苏类型细胞株
c7038 spc-a1人肺癌复苏类型细胞株
c7039 vmrc-lcd人肺癌腺癌复苏类型细胞株
c7040 colo-699人肺癌腺癌复苏类型细胞株
c7041 hcc2935人肺癌腺癌复苏类型细胞株
c7042 rerf-lc-ad1人肺癌腺癌复苏类型细胞株
c7043 rerf-lc-kj人肺癌腺癌复苏类型细胞株
c7044 dms114人小四代细胞肺癌复苏类型细胞株
c7045 dms53人小四代细胞肺癌复苏类型细胞株
c7046 umc-11人肺良性肿瘤复苏类型细胞株
c7047 sw1573人肺泡四代细胞癌复苏类型细胞株
c7048 nci-h820人乳头状腺癌肺癌
c7049 hfl-1人上肺上皮复苏类型细胞株
c7050 ll2小鼠lewis肺癌
c7051 bel7402人肝癌复苏类型细胞株
c7052 bel7405人肝癌复苏类型细胞株
c7053 hccc9810人肝癌复苏类型细胞株
c7054 hcclm6人肝癌复苏类型细胞株
c7055 jhh-2人肝癌复苏类型细胞株
c7056 mhcc97人肝癌复苏类型细胞株
c7057 qgy7701人肝癌复苏类型细胞株
c7058 qgy7703人肝癌复苏类型细胞株
c7059 smmc-7721人肝癌复苏类型细胞株
c7060 snu-475人肝癌复苏类型细胞株
c7061 mh-22a小鼠c3ha肝癌复苏类型细胞株
c7062 hepa-1c1c7小鼠肝癌复苏类型细胞株
c7063 khos/np人骨肉瘤复苏类型细胞株
c7064 sk-es-1人骨肉瘤复苏类型细胞株
c7065 mm.1s人lambda骨髓瘤复苏类型细胞株
c7066 l-363人多发性骨髓瘤复苏类型细胞株
c7067 molm-16人骨髓白血病复苏类型细胞株
c7068 amo-1人骨髓浆四代细胞瘤
c7069 rpmi8226人骨髓瘤复苏类型细胞株
c7070 ccrfs-180ii小鼠肉瘤复苏类型细胞株
c7071 mz-crc-1人髓样甲状腺癌复苏类型细胞株
c7072 z-138人b四代细胞非霍奇金淋巴瘤
c7073 oci-ly3人b四代细胞淋巴瘤"
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